岛津SPE小柱在食品中四环素类残留的检测

方法一：依据GBT21317-2007

1. 前处理（以牛肉为例）

取已经匀浆好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml离心管中，加入50ul，10ppm的混标，保证每kg肉中含1mg标样。
分别加入20ml、20ml、10ml 0.1mol/L EDTA-Mallvaine缓冲液冰水浴中超声10min后取出，3000r/min下离心5min，合并上清液，定容至50ml，离心，取上清液，混匀，待净化。

Mallvaine缓冲液配制：将500ml 0.1mol/L 柠檬酸溶液与312.5 ml 0.2mol/L 磷酸氢二纳溶液混合，NaOH溶液调节pH值至4.0+/- 0.05
0.1mol/L EDTA-Mallvaine缓冲液配制：称取30.25g乙二胺四乙酸二钠放入812.5 ml Mallvaine缓冲液中，使其溶解，混匀。 

固相萃取小柱：
InertSep Pharma （3ml/60mg或6ml/500mg）WondaSep HLB 3ml/60mg均可 

SPE方法：
活化/平衡：5ml甲醇、5ml水
上样：50ml待测液中准确取10ml过柱
清洗：5ml水、5ml甲醇：水=1：19
小柱脱水干燥
洗脱：10ml甲醇：乙酸乙酯=1：9
将洗脱液氮吹至干，用流动相定容至1ml，过滤，待测。

2. 色谱分析

色谱柱：InertSustain C18 5um 4.6*250mm
流动相：乙腈：甲醇：0.01%草酸溶液=2：1：7
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
进样量：60 ul
检测波长：350nm
仪器：Shimadzu LC-20A

3. 实验结果

基质加标浓度为 1mg/kg，3次平行实验结果如下：

代表图谱

4. 结论

在此实验条件下，采用固相萃取小柱InertSep Pharma对牛肉中四环素、土霉素、金霉素进行加标回收率实验，回收率*要求。

方法二：岛津技迩改进的方法

1. 前处理（以牛肉为例）

取已经匀浆好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml离心管中，加入50ul，10ppm的混标，保证每kg肉中含1mg标样。
分别加入30ml、20ml EDTA-Mallvaine缓冲液冰水浴中超声10min后取出，3000r/min下离心5min，合并上清液，定容至50ml，离心，取上清液，混匀，待净化。

EDTA-Mallvaine缓冲液配制：取 307ml 0.1mol/L 柠檬酸溶液 和 193ml 0.5mol/L Na2HPO4混匀，再加入1.86g Na2 EDTA。 

固相萃取小柱：
InertSep PLS-2 20ml/265mg 

SPE方法：
活化/平衡：10ml甲醇、10ml水、5ml Na2EDTA缓冲液
上样：50ml待测液过柱
清洗：10 ml水
小柱脱水干燥
洗脱：10ml甲醇
将洗脱液氮吹至干，用流动相定容至1ml，过滤，待测。 

2. 色谱分析

同方法一 

3. 实验结果 

基质加标浓度为 1mg/kg，3次平行如下：

4. 岛津技迩改进的方法优势
InertSep PLS-2 20ml/265mg 小柱规格大，不需要抽负压即可自然滴落，操作更方便，且回收率高。