WATERS液相色谱柱根据功能分为HPLC和UHPLC、UPLC柱,根据内径大小又有常规分析柱,、窄径柱和毛细管柱的类型区别,其中应用广泛的液质联用仪就是用的窄径柱。因为分析类的仪器主要致力于对样品成分的判断,就需要能够准确分离少量样品的内径较小的色谱柱。
WATERS液相色谱柱的储存液无特殊说明,均为评价报告所示的流动相。在使用前,一定要注意储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中,如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂,应先用10%左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下,否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出,造成堵塞。
在使用中一定要避免出现以下的情况:
一、避免反冲:一般来说色谱柱不能反冲,只有使用说明书上标明该柱可反冲才可以反冲除去留在柱头上的杂质。否则会降低柱效。
二、避免直接改变溶剂的组成:在需要改变检测样品溶液组成时,应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。且在使用次洗脱能力强的洗脱液冲洗色谱柱时,对流路系统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡,每种流动相的体积应是柱体积的20倍左右。
三、避免压力和温度的急剧变化:温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会冲动柱内填料,因此在调节流速时应该缓慢进行,以保持内填料的稳定性。
四、禁止将缓冲溶液长时间存放在色谱柱内:保存时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。
五、禁止样品未经处理直接进入色谱柱:避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内,需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。
六、禁止未经处理直接封存:使用完成之后须使用相宜溶剂进行清洁处理,例如ODS柱宜用甲醇冲洗至基线平衡;当采用盐缓冲溶液作流动相时,使用完后应用无盐流动相冲洗;含卤族元素(氟、氯、溴)的化合物可能会腐蚀不锈钢管道,不宜长期与之接触;装在液相色谱仪上的色谱柱如不经常使用,应每隔4-5天开机冲洗15分钟。
七、避免流动相使用不当而破坏固定相:选择使用适宜的流动相(尤其是pH),以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一段预柱,分析柱是键合硅胶时,预柱为硅胶,可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶"饱和",避免分析柱中的硅胶基质被溶解。