动物源性食品中四环素类残留检测

动物源性食品中四环素类残留检测

方法一：依据GBT21317-2007

1. 前处理（以牛肉为例）
     取已经匀浆好的牛肉5g（到0.01g），置于50ml离心管中，加入50ul，10ppm的混标，保证每kg肉中含1mg标样。
    分别加入20ml、20ml、10ml 0.1mol/L EDTA-Mallvaine缓冲液冰水浴中超声10min后取出，3000r/min下离心5min，合并上清液，定容至50ml，离心，取上清液，混匀，待净化。
Mallvaine缓冲液配制：将500ml 0.1mol/L 柠檬酸溶液与312.5 ml 0.2mol/L 磷酸氢二纳溶液混合，NaOH溶液调节pH值至4.0+/- 0.05
    0.1mol/L EDTA-Mallvaine缓冲液配制：称取30.25g乙二胺四乙酸二钠放入812.5 ml Mallvaine缓冲液中，使其溶解，混匀。 
固相萃取小柱：
InertSep Pharma （3ml/60mg或6ml/500mg）WondaSep HLB 3ml/60mg均可 
SPE方法：
活化/平衡：5ml甲醇、5ml水
上样：50ml待测液中准确取10ml过柱
清洗：5ml水、5ml甲醇：水=1：19
小柱脱水干燥
洗脱：10ml甲醇：乙酸乙酯=1：9
将洗脱液氮吹至干，用流动相定容至1ml，过滤，待测。
2. 色谱分析
色谱柱：InertSustain C18 5um 4.6*250mm
流动相：乙腈：甲醇：0.01%草酸溶液=2：1：7
流速：1.0ml/min
柱温：25℃
进样量：60 ul
检测波长：350nm
仪器：Shimadzu LC-20A
3. 实验结果
基质加标浓度为 1mg/kg，3次平行实验结果如下：