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液相色谱柱反冲洗的方法

更新时间:2025-10-21      浏览次数:22


液相色谱柱反冲洗是一种用于清除柱头污染物的维护方法,需谨慎操作以避免损坏色谱柱。核心方法包括使用极性递增的溶剂系列(如甲醇乙腈异丙醇二氯甲烷正己烷)反向冲洗,每种溶剂冲洗10-20倍柱体积,并以异丙醇过渡后恢复初始流动相。‌‌

反冲洗操作步骤

预处理:若流动相含缓冲盐,先用纯水冲洗5-10倍柱体积去除盐分,防止有机溶剂导致盐沉淀。‌‌

溶剂冲洗顺序

  • 反向冲洗流速控制在1-2 mL/min(250×4.6 mm柱),避免压力过高。‌‌

  • 溶剂顺序:100%水 → 100%甲醇 → 100%乙腈 → 100%异丙醇→ 100%二氯甲烷→ 100%正己烷。‌‌

  • 每种溶剂冲洗至少10倍柱体积(如250×4.6 mm柱约25 mL)。‌‌

过渡与平衡:以10倍柱体积异丙醇过渡,再反向切换至初始流动相(不含缓冲盐),最后用起始流动相平衡30分钟。‌‌



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