色谱柱的活化方法

‌色谱柱活化方法的核心步骤是根据色谱柱类型选择合适的冲洗流程，旨在替换保存液、去除杂质并平衡固定相。‌不同色谱柱的活化方法差异显著，需遵循以下分类操作：

一、常见色谱柱活化方法分类说明

1. ‌反相色谱柱（如C18柱）‌：

• ‌第一步‌

  ：用纯有机溶剂（甲醇或乙腈）冲洗20-30个柱体积‌

• ‌第二步‌

  ：混合过渡流动相（甲醇/乙腈与水比例50:50）冲洗10个柱体积‌

• ‌第三步‌

  ：用实际分析流动相平衡10-30个柱体积直至压力稳定‌

• ‌注意事项‌

  ：活化过程不宜接入检测器，避免污染‌

2. ‌正相色谱柱‌：

• ‌直接使用流动相平衡20-30个柱体积‌

  ，无需过渡冲洗‌

• ‌特殊保存状态‌

  ：部分正相柱保存于正己烷或异丙醇，活化时需按出厂说明调整‌

3. ‌离子交换色谱柱（如SAX、SCX）‌：

• ‌第一步‌

  ：用100%甲醇或乙腈冲洗20个柱体积‌

• ‌第二步‌

  ：转换为适合离子强度和pH值的流动相平衡‌

4. ‌特殊功能柱（如氨基柱、氰基柱转为反相使用）‌：

• ‌预处理‌

  ：需用异丙醇或乙醇冲洗50-100个柱体积转换相态

5. ‌HILIC模式色谱柱‌：

• ‌活化流程‌

  ：先用50倍柱体积的50%乙腈/水混合液平衡，再用流动相冲洗20柱体积

二、通用活化原则

• ‌流速控制‌

  ：初始冲洗采用低流速（如0.5-1mL/min），逐步提升至工作流速‌

• ‌溶剂纯度‌

  ：必须使用HPLC级溶剂并提前过滤‌

• ‌柱体积计算‌

  ：标准柱体积约为柱长（cm）× 内径半径²（cm²）× π，可根据具体尺寸换算

三、操作建议

• ‌新柱活化前‌

  ：建议建立色谱柱性能测试台账，追踪柱压和峰型变化

• ‌长期保存后‌

  ：需重新活化，避免使用缓冲盐保存

• ‌维护扩展‌

  ：日常使用可搭配预柱保护延长分析柱寿命

‌关键提示‌：活化方法需严格参照色谱柱说明书，厂商建议的柱保存液和pH适用范围是操作基准。‌