HPLC法分析带保护基团的亚磷酰胺单体

摘要：本文建立了亚磷酰胺单体N-苯甲酰基-5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-甲基腺苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)的HPLC测定方法。采用色谱柱Shim-pack Scepter HD-C18、ShimNex UP C18分析此亚磷酰胺单体，结果显示，此亚磷酰胺单体的两个手性同分异构体色谱峰峰型良好，分离度大于1.5，满足分析要求。此方法可为带保护基团的亚磷酰胺单体的检测提供参考。
关键词：带保护基团的亚磷酰胺单体 Shim-pack Scepter HD-C18 ShimNex UP C18 HPLC
 

1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材

Shimadzu LC-40D 高效液相色谱仪；
色谱柱：Shim-pack Scepter HD-C18（5 μm，4.6×250mm；P/N：227-31024-06）；
色谱柱：ShimNex UP C18（5 μm，4.6×250mm；P/N：380-01231-49）；
纯水机：PR-FP-0120α-MT1（+ 60L水箱 + 取水器）；
SHIMSENDisc HPTFE针式过滤器（P/N：380-00341）；
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial（P/N：227-34001-01）；

SHIMSEN Pipet移液枪：SHIMSEN Pipet PMII-10（P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（P/N：380-00751-06）。

1.2 分析条件

柱温：20℃
检测波长：235nm
流速：1.0 mL/min
进样量：5 µL
流动相：A：20mM甲酸铵，B：乙腈：甲醇=1：2；A：B=15：85

2. 实验结果

2.1 色谱柱：Shim-pack Scepter HD-C18（5 μm，4.6×250mm；P/N：227-31024-06）

按照上述色谱条件（1.2）进行采集，对照品溶液如下：
对照品溶液

2.2 色谱柱：ShimNex UP C18（5 μm，4.6×250 mm；P/N：380-01231-49）；

按照上述色谱条件（1.2）进行采集，对照品溶液如下：
对照品溶液

3. 结论

本文建立了带保护基团的亚磷酰胺单体N-苯甲酰基-5'-O-(4,4-二甲氧基三苯甲基)-2'-O-甲基腺苷-3'-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基)的HPLC测定方法。采用色谱柱Shim-pack Scepter HD-C18、ShimNex UP C18分析此亚磷酰胺单体，结果显示，此亚磷酰胺单体的两个手性同分异构体峰，峰型良好，分离度大于1.5，满足分析要求。此方法可为带保护基团的亚磷酰胺单体的检测提供参考。