储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入Thermo赛默飞液相色谱柱内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附- 解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。当色谱系统中需使用pH 值大于8 的流动相时,应选用耐碱的填充剂,如采用高纯硅胶为载体并具有高表面覆盖度的键合硅胶填充剂、包覆聚合物填充剂、有机-无机杂化填充剂或非硅胶填充剂等,当需使用pH值小于2的流动相时,应选用耐酸的填充剂,或有机-无机杂化填充剂等。
如果碱性化合物的极性太强,或碱性太强;可以选择Thermo赛默飞液相色谱柱在高pH值检测或者选用HILIC色谱柱,硅胶柱在反相条件下使用,这也是很经典的检测碱性样品的方法,选择强离子交换柱,也有使用C18+强阴离子对试剂或强阴离子交换色谱柱。开孔的填料多了个类似分子筛功能,所以选择孔径一定要关注分子量,蛋白,一般都需要在160A以上,在120A左右,一般快速柱孔径都很小,可以缩短样品路径。