在Dionex戴安色谱柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的,靠近管壁的部位比较疏松,易产生沟流,流速较快,影响冲洗剂的流形,使谱带加宽,这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中,柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。柱压增高的原因主要是由于色谱柱柱头被污染引起的,而色谱柱整个柱床并未被严重破坏。如果能在Dionex戴安色谱柱的前端加一短柱,让所有的污染或破坏均在此发生,就可以达到保护相对较昂贵的色谱柱作用,这就是保护柱的设计初衷,也是保护柱的作用所在。这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等。
储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱内, 由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数, 在两相中作相对运动时, 经过反复多次的吸附解吸的分配过程, 各组分在移动速度上产生较大的差别, 被分离成单个组分依次从Dionex戴安色谱柱内流出。流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果;降低柱压降,延长泵的使用寿命(可运用提高温度的方法降低流动相的黏度),流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,使用对紫外吸收较低的溶剂配制,流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行,在流动相配制好后,一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。